液相色谱柱在使用前应注意以下事项
发布时间:2023-01-28 点击次数:72次
液相色谱柱在使用前,最好进行柱的性能测试,并将结果保存起来,作为今后评价柱性能变化的参考。在做柱性能测试时要按照液相色谱柱出厂报告中的条件进行,只有这样,测得的结果才有可比性。但要注意:柱性能可能由于所使用的样品、流动相、柱温等条件的差异而有所不同。
1、样品的前处理:
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?、凼褂?.45μm或0.22μm的过滤膜过滤除去微粒杂质。
2、流动相的配制:
液相色谱是样品组分在柱填料与流动相之间质量交换而达到分离的目的,因此要求流动相具备以下的特点:
?、倭鞫喽匝肪哂幸欢ǖ娜芙饽芰?,保证样品组分不会沉淀在柱中;
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?、哿鞫嗟酿ざ纫×啃?,以便得到好的分离效果;降低柱压降,延长泵的使用寿命;
?、芰鞫嗟奈锘灾室胧褂玫募觳馄飨嗍视?。如使用UV检测器,最好使用对紫外吸收较低的溶剂配制;
?、萘鞫喾械悴灰?,否则容易产生气泡,导致实验无法进行;
?、拊诹鞫嗯渲坪煤?,一定要进行脱气。除去溶解在流动相中的微量气体既有利于检测,还可以防止流动相中的微量氧与样品发生作用。
3、流动相流速的选择:
因柱效是柱中流动相线性流速的函数,使用不同的流速可得到不同的柱效。对于一根特定的液相色谱柱,要追求最佳柱效,最好使用最佳流速。对内径为4.6mm的液相色谱柱,流速一般选择1ml/min,对于内径为4.0mm柱,流速0.8ml/min为佳;
当选用最佳流速时,分析时间可能延长??刹捎酶谋淞鞫嗟南吹忧慷鹊姆椒ㄒ运醵谭治鍪奔?。